常見(jiàn)問(wèn)題
構(gòu)建亞細(xì)胞定位載體時(shí)，目標(biāo)蛋白連在熒光蛋白的N端更好，還是C端更好？
答：大部分文獻(xiàn)的亞細(xì)胞定位載體一般都是把目標(biāo)蛋白連在N端，GFP放在C端；如果目標(biāo)蛋白連在C端，在加工過(guò)程中有可能信號(hào)肽 會(huì)連同GFP一起被切掉 ，導(dǎo)致熒光淬滅，或熒光信號(hào)弱。也有少部分目標(biāo)蛋白必須連在C端才有信號(hào)。極少的目標(biāo)蛋白需要連入GFP中間才有信號(hào)。融合在熒光蛋白N端的目標(biāo)蛋白一般無(wú)法得到過(guò)氧化物酶體的定位結(jié)果，融合在熒光蛋白C端的目標(biāo)蛋白一般無(wú)法得到線粒體、質(zhì)體的定位結(jié)果。選擇融合位置時(shí)需考慮蛋白質(zhì)的性質(zhì)和功能，有時(shí)可能需要嘗試兩種方式以確定最佳融合位點(diǎn)。
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